利用MVE液氮罐低溫保存人體結(jié)膜上皮細(xì)胞的案例
 

目的：探索人眼結(jié)膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)和細(xì)胞保存的最佳方法，建立人結(jié)膜上皮細(xì)胞系，進(jìn)一步研究人結(jié)膜的病理、生理特點(diǎn)及為毒理試驗(yàn)提供可靠的細(xì)胞模型。

方法：分別用組織塊培養(yǎng)法、機(jī)械分離法及混合消化液培養(yǎng)法體外培養(yǎng)正常成年人結(jié)膜上皮細(xì)胞，通過觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)特性并用原位免疫組化方法鑒定培養(yǎng)細(xì)胞;收集第3代和第4代融合的細(xì)胞液氮罐凍存，保存30天后復(fù)蘇，觀察復(fù)蘇成功率。

結(jié)果：3種取材方法中，混合消化液培養(yǎng)法細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖較快，培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)多樣，貼壁生長(zhǎng)。免疫組化Keratin染色陽性，細(xì)胞凍存復(fù)蘇的成功率均達(dá)到90％。組織塊培養(yǎng)法細(xì)胞生長(zhǎng)比較緩慢，而機(jī)械分離法細(xì)胞未見貼壁生長(zhǎng)。

結(jié)論：混合消化液培養(yǎng)法是人結(jié)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)的最佳方法，通過液氮罐凍存可保存培養(yǎng)的人結(jié)膜上皮細(xì)胞。MVE液氮罐